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本试剂盒用于从小量样品的动物细胞或组织中纯化出RNA。样品在Buffer Lysis-DR中被裂解和匀浆。基因组DNA污染可通过特殊的gDNA清除柱有效去除。RNA则被吸附到SR-10 RNA吸附柱。最后，RNA从SR-10 RNA吸附柱被洗脱出来。提取的RNA可直接用于且特别适用于对少量DNA污染敏感的下游应用，比实时荧光定量PCR。过程简单快速，无需苯酚/氯仿抽提，全部过程不超过30min。

• RNA提取过程中提供高效的gDNA清除柱以去除DNA。
  
• 可完全去除DNA污染。
  
• 整个过程可在30min内完成。
  
• 得率高，重复性好。
  
• 无需苯酚、氯仿抽提或乙醇沉淀。
  
• RNA纯度高，适用于对少量DNA污染敏感的下游应用。

• 离心速度至少达到12000×g的小型离心机
  
• RNase-Free的移液枪和枪头
  
• RNase-Free离心管(1.5mL或2mL)
  
• 漩涡混合器
  
• 乙醇(96～100%)

• Buffer Lysis-DR和GT Solution(浓缩液)在低温条件下可能会出现盐沉淀。加热至56℃可溶解沉淀，溶液降至室温后再使用。
  
• 提供的GT Solution和NT Solution为浓缩液。第一次使用前，加入12/60mL乙醇到18/90mL GT solution，加入24/120mL乙醇到6/30mL NT solution，配制成工作液。
  

  成分	50T	250T
  GT Solution	18mL	90mL
  乙醇(96～100%)	12mL	60mL
  GT最终体积	30mL	150mL

  
  

  成分	50T	250T
  NT Solution	6mL	30mL
  乙醇(96～100%)	24mL	120mL
  NT最终体积	30mL	150mL

• 操作RNA相关实验时要十分小心。从RNA样品的准备到后续的纯化和分析均应保持在RNase-free的环境中。使用RNase- free离心管、枪头、凝胶。始终佩戴手套。

• 样品准备
  
  • 培养的细胞
    
    • 细胞悬液：将适当数量的细胞室温300×g离心5min(最多1×10⁷个细胞)。小心吸走上清，进入步骤2。
      
    • 单层细胞：吸走培养基，加入350μL Buffer Lysis-DR到细胞培养皿中。用细胞刮收集裂解液，将裂解液吸入离心管中。涡旋或吹打混匀，确保无可见的细胞团块，进入步骤3。
    • 如果不能立即样品RNA，建议-80℃长期保存。
      
    • 避免反复冻融，以免RNA降解。
  • 动物组织：取15～30mg动物组织，用液氮研磨成粉末。将冰冻的粉末转移至1.5mL RNase-free离心管中。
    
  • 植物：取25～50mg植物组织，用液氮研磨成粉末。将冰冻的粉末转移至1.5mL RNase-free离心管中。
• 立即加入350μL Buffer Lysis-DR到上述1.5mL RNase-Free的离心管中，涡旋混匀。
  
  • 混合液室温孵育5min。
• 将gDNA清除柱放入2mL收集管中。将上述裂解产物加入到吸附柱后，室温静置1min，9000×g室温离心1min。
  
• 将收集管中的液体转移至新的RNase-Free离心管中，用于RNA的纯化。
  
• 加入250μL乙醇到步骤4的液体中，充分混匀。
  
• 将SR-10 RNA吸附柱放入收集管中，并将上述混合液转移到SR-10 RNA吸附柱，9000×g室温离心1min。倒掉收集管中的液体。
  
• 将SR-10 RNA吸附柱放回收集管，加入500μL GT Solution，室温静置1min后9000×g室温离心1min。倒掉收集管中的液体。
  
  • 检查GT Solution是否已加入乙醇。
• 加入500μL NT Solution到吸附柱中，室温静置1min后9000×g室温离心1min。倒掉收集管中的液体。
  
  • 检查NT Solution是否已加入乙醇。
• 将吸附柱放回收集管中，9000×g室温离心2min。
  
• 将吸附柱放入一个新的RNase-free离心管中，吸附柱开盖直至乙醇完全挥发(大概3～5min)。
  
  • 使SR-10 RNA吸附柱的吸附膜干燥是非常必要的，因为残留的乙醇可能会影响后续反应。这一步骤的离心确保了在接下来的洗脱过程中不会有残留的乙醇。
• 向吸附膜中央加入30～50μL RNase-Free的水，室温静置2min，9000×g离心2min。
  
  • 离心管中的溶液为RNA样品，可直接用于后续分子生物学实验或保存于-70℃。

• 吸附步骤中柱子被堵塞
  
  • 加入到吸附柱前确保样品已彻底匀浆。
    
  • 减少原始材料使用量。
• RNA降解
  
  • 使用新鲜的样品。对于需要冻存的样品，确保样品采集后立即被放入液氮冷冻，并妥善保存于-70℃。
    
  • 我们推荐用液氮处理样品，并立即将样品裂解。
    
  • 请在RNase-free的环境中操作。
    
  • 所有操作步骤均戴手套。经常更换手套。
    
  • 推荐使用RNase-free的离心管。
• 得率低
  
  • 将组织样品彻底匀浆。
    
  • 使用适当量的样品。
    
  • 确保GT Solution和NT Solution已加入乙醇。
    
  • 洗脱步骤按照说明书严格操作。
• 后续酶促反应被抑制
  
  • 来源于GT Solution和NT Solution的残留乙醇可抑制后续酶促反应。柱子12000×g离心2min以彻底去除残
    留的乙醇。
    
  • 残留的盐离子可抑制后续酶促反应。GT Solution和NT Solution应在在室温下使用(15～25℃)。
• DNA有残留
  
  • 减少原始材料使用量。
    
  • 彻底去除细胞培养基或稳定剂。